常規(guī)切片的注意事項

　　新鄉(xiāng)市禾力教學(xué)設(shè)備有限公司是一家主要從事生產(chǎn)銷售各類農(nóng)林、醫(yī)學(xué)、師范院校教學(xué)使用的生物顯微玻片、動植物、醫(yī)學(xué)標(biāo)本、醫(yī)療器械及各類體育器材的綜合性公司。 公司一貫注重科技研發(fā)，把不斷創(chuàng)新、研制適合教學(xué)要求的優(yōu)質(zhì)新產(chǎn)品作為我們不懈的追求。

    今天小編為你解析：

    1 . 取材 

    取材的好壞，直接影響切片的質(zhì)量。醫(yī)生在取材時，首先要有一把鋒利的取材刀，在切割組織時要避免取材刀來回拖拉，切取的組織塊厚薄要均勻，一般厚度以0.2 ～0.3cm 為適，較容易發(fā)脆的組織如甲狀腺、肝臟、血塊、淋巴結(jié)、大塊癌組織等可適當(dāng)厚一點，而脂肪組織、肺組織、纖維性腫瘤、平滑肌瘤等致密的或試劑不易滲入的組織應(yīng)取薄一些；淋巴結(jié)應(yīng)修掉兩側(cè)球冠，并盡量剔除周圍的脂肪組織。在取材中還應(yīng)十分注意組織內(nèi)是否有縫線或骨組織，如碰到不可避免的鈣化組織，應(yīng)與技術(shù)室講明，在切取纖維組織、肌肉組織、胃腸道時，應(yīng)注意纖維及肌肉的走向，取材時盡可能按與纖維平行走向切取為佳。 

    2 . 固定 

    固定是技術(shù)室工作的一步，也是在整個制片過程中無法補(bǔ)救的一步。所謂“固定”，就是組織離體后，用各種辦法使其細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)盡量接近其生活狀態(tài)時的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置的過程。固定的目的是為了防止組織細(xì)胞自溶與腐敗，防止了細(xì)胞內(nèi)的酶對蛋白質(zhì)的分解作用，使細(xì)胞內(nèi)的各種成分如蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物或酶類轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持原有的結(jié)構(gòu)與生活時相仿。另外，組織固定后，均呈一定的硬化狀態(tài)，增加組織韌性，而且不易變形，有利于以后的組織處理。所以組織一旦離體必需及時固定，固定液的量應(yīng)為組織的5 倍。固定的關(guān)鍵主要與固定的及時性、固定液的選擇、固定液的濃度、固定的溫度和時間有關(guān)。常用的固定液為10％福爾馬林。筆者認(rèn)為，10％福爾馬林由于受到福爾馬林的質(zhì)量、使用時的揮發(fā)和取材時帶入的水分影響，濃度被降低致組織固定不足，而高濃度的福爾馬林，降低了對組織的穿透性，形成周圍固定好而中央固定不到的現(xiàn)象。通過實踐，本人認(rèn)為以酸性12～15％的福爾馬林。大標(biāo)本（2cm 厚）一般需要6～12個小時，小標(biāo)本一般需要3～6 個小時；當(dāng)室溫低18℃時，可在37℃以下的溫箱內(nèi)加溫4～6 個小時。由于HE 染色著色PH為3.5～4.5, 中性福爾馬林對蘇木素染色有一定影響,細(xì)胞核容易發(fā)灰,核染色質(zhì)不佳。 

    所以, 盡管中性福爾馬林對抗原有很好的保存作用，但酸性福爾馬林對絕大多數(shù)抗原來說也有很好的保存作用，所以在沒有特別處理的情況下常規(guī)HE 用12～15％酸性福爾馬林也可以（每100毫升12～15％福爾馬林液內(nèi)加5毫升冰醋酸）。骨髓、結(jié)締組織固定以Bouin 液為佳，經(jīng)Bouin 液固定后的組織必須流水沖洗4 小時以上。有條件的單位可根據(jù)不同要求選用二種或二種以上的固定液；少數(shù)單位還可建立組織冷凍庫，以便適應(yīng)各種特殊的處理要求。 

    3. 水洗 

    固定后水洗（10～20 分鐘），通常被很多人所忽視，而水洗不徹底，容易造成脫片和染色不鮮艷。對需做免疫組織化學(xué)的組織，更不應(yīng)當(dāng)忽視。福爾馬林不利于組織塊內(nèi)抗原的保存。 

    4 . 脫水和透明 

    所謂脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來，以利于有機(jī)溶劑的滲入，這一過程稱為脫水。脫水是否徹底，直接關(guān)系到組織是否能充分透明，而脫水過度（原因是組織在純酒精內(nèi)時間過久，發(fā)生組織質(zhì)地發(fā)生變化）容易造成組織發(fā)脆。造成組織發(fā)脆的原因還有加溫（溫度超過 35℃）、脫水劑內(nèi)加有丙酮、浸蠟用的石蠟中二甲苯過多等等。一般我們總認(rèn)為組織發(fā)脆跟高濃度酒精有關(guān)，而忽視了與低濃度的酒精關(guān)系，其實低濃度的酒精具有強(qiáng)大的穿透力，比純酒精更容易滲透到組織塊內(nèi)部使之脫水，組織如果在低濃度酒精里充分脫水，在高濃度酒精里只需脫去從低濃度到高濃度之間的水份，因此，僅需短時間就可完成，如果這時不縮短純酒精的時間，便會引起組織發(fā)脆；如果脫水時加溫，使用丙酮，還可引起組織收縮，并影響免疫組織化學(xué)的標(biāo)記。

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